o   Gradilla

PRUEBA DE COOMBS

INTRODUCCIÓN

La técnica de coombs fue descrita adentro 1945 por Cambridge inmunologías Robin Coombs tubos de prueba. Es una prueba que busca anticuerpos  que puedan fijarse a los glóbulos rojos y causar su destrucción prematura (hemolisis).

FUNDAMENTO:

Permite demostrar la presencia de anticuerpos incompletos mediante el uso de un segundo anticuerpo, que es una anti globulina.

Existen dos formas de realizar la prueba de  coombs, directa e indirecta.

La prueba de coombs directa se utiliza para detectar anticuerpos que ya se han fijado a la superficie de los glóbulos rojos, se emplea antiglobulina  para la detección de anticuerpos incompletos antieritrocitarios que ya se encuentran unidos  “in vivo” a los hematíes.

La prueba de coombs indirecta busca anticuerpos circulantes libres contra una serie de globulos rojos estandarizados, se emplea la antiglobulina para  la detección de los  anticuerpos incompletos  antieritrocitarios no unidos  “in vivo” a los hematíes.

La finalidad de esta incubación consiste en lograr una sensibilización in vitro de los hematíes  tipo por parte de los Ac incompletos que pueden estar contenidos en el suero problema.

COOMBS DIRECTA

MATERIAL:

o   Centrifuga

o   Tubos de ensaye

o   Suero fisiológico

o   Pipetas pasteur

o   Suero coombs

o   Suspensión  de hematíes  problema.

TECNICA:

1.    Preparar una suspensión al 5% en solución salina

2.    Colocar una gota de suero de Coombs en 1 tubo.

3.    Añadir 1-2 gotas de la suspensión

4.    Mezclar y centrifuga 1-2 min. A 2000 r.p.m.

5.    Sacar de la centrifugadora y re suspender el botón celular y observar si hay o no aglutinación.

RESULTADOS.

Si hay aglutinación, hay Ac (anticuerpos)  incompletos.

COOMBS INDIRECTA

MATERIAL:

o   Gradilla

o   Centrifuga

o   Tubos de ensaye

o   Solución salina

o   Pipetas pasteur

o   Suero coombs

o   Suspensión de hematíes al 5%

TECNICA:

1.    Preparar una suspensión de hematíes tipo al 5% en solución salina

2.    Colocar en 1 tubo 2 gotas de los hematíes tipo y dos gotas de suero problema.

3.    Mezclar e incubar  a 37° C durante  30 min.

4.    Lavar 3 veces el producto incubado en solución salina

5.    Tras el ultimo lavado   resuspender en sedimento de hematíes.

6.    Añadir  2 gotas  del suero coombs .

7.    Mezclar bien y centrifugar  a 2000 rpm 1-2 min.

8.    Agitar el tubo y observar  si hay o no aglutinación.

RESULTADOS:

Si existe aglutinación tiene Ac – incompletos

VALORES NORMALES:

La falta de agrupación de células (aglutinación), indicando que no hay Ac para los glóbulos rojos es lo normal.

La prueba de Coombs directa anormal (positiva) significa  que usted tiene anticuerpos que actúan contra sus glóbulos rojos, lo cual puede deberse a:

·         Anemia hemolítica autoinmune sin otra causa

·         Leucemia linfocítica crónica u otro trastorno  linfoproliferativo.

·         Anemia hemolítica inducida por fármacos (muchos fármacos han sido asociados  con estas complicaciones).

·         Eritroblastosis fetal (enfermedad hemolítica del recién nacido).

·         Mononucleosis infecciosa

·         Infección por mico plasma

·         Sífilis

·         Lupus eritematoso sistémico u otra infección reumatológica.

·         Reacción a transfusión  como la ocasionada por unidades de sangre cotejadas de manera impropia.

Una prueba de  coombs indirecta   anormal (positiva) significa que usted tiene anticuerpos que actuaran contra los glóbulos rojos que el cuerpo asume como extraños. Esto puede  sugerir  la presencia de:

·         Anemia hemolítica auto inmunitaria  o inducida por fármacos

·         Eritroblastosis fetal (enfermedad hemolítica)

·         Incompatibilidad sanguínea  (cuando se utiliza en bancos de sangre).

CONCLUSIÓN

La prueba de coombs sirve para la determinación  de  las enfermedades  ya mencionadas, siendo también auxiliada por distintas pruebas especificas, que de igual manera buscan sospecha de la enfermedad. Esto a reacciones llevadas a cabo con anticuerpos que reaccionan uno con otro para formar una reacción y determinar un resultado. Muchas de las enfermedades en las cuales es positiva esta prueba son trastornos eritrocitarios mas comúnmente

PRUEBA PARA HIV

(TRINITY BIOTECH Uni-Gold)

INTRODUCION:

La prueba para HIV Uni-Gold de Trinity Biotech  es un ensayo individual  la para la detección de anticuerpos para el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 y 2 en suero, plasma o sangre total.

El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH)  se a reconocido como el agente etiológico del síndrome de la inmunodeficiencia adquirida  (SIDA). El VIH  se ha aislado  de:

a) Numerosos pacientes con SIDA y desordenes relacionados.

b) Miembros asintomáticos de grupos de alto riesgo  SIDA.

c) Pacientes de otros factores de alto riesgo  quienes han contraído SIDA  después de recibir transfusiones sanguíneas.

La mayoría de los pacientes con SIDA o complejos relacionados con con SIDA (ARC) tienen anticuerpos para las proteínas estructurales del virus de HIV.

La infección por VIH se diagnostica mediante la detección de  anticuerpos  específicos para el virus.  Actualmente   se conocen dos tipos de  HIV-1 y HIV-2  con 40- 60% de aminoácidos homólogos  entre las dos cepas.

FUNDAMENTO

Las proteínas recombinantes representando las regiones de las proteínas  de la cubierta de HIV-1 y HIV-2, la glicoproteína gp41 gp120 (HIV-1)    y la glicoproteína gp36 (HIV-2)  respectivamente son inmovilizados en la región de prueba de la tira de nitrocelulosa. Estas proteínas también se unen al oro coloidal  y se impregnan por debajo de la región de prueba de la tira de nitrocelulosa. Estas proteínas también se unen al oro coloidal  y se impregnan por debajo de la región de prueba del  cartucho. Una banda delgada de la membrana de nitrocelulosa también se sensibiliza  como una región control.

Durante la prueba se aplican dos gotas de suero, plasma o sangre  total al área de muestra, seguido de dos gotas de buffer de lavado y se deja que reaccionen. Los anticuerpos  IgG  específicos para las proteínas  recombinantes  del HIV-1 y HIV-2, reaccionan con los antígenos unidos  a las partículas de oro coloidal. El complejo partículas de oro coloidal- anticuerpos se mueve cromatologicamente a través de la membrana  a las regiones de prueba  del cartucho.

Una reacción positiva se visualiza por una banda d color  rosa/purpura en la región de  prueba del cartucho.

Una reacción negativa ocurre en ausencia de anticuerpos  inmunoglobulinas humanos  para HIV  en la muestra analizada.

Consecutivamente se desarrolla una banda no detectable  visualmente en una reacción  de prueba del cartucho.

PRECEDIMIENTO

MATERIAL Y REACTIVOS 

Cartucho de prueba

• ·         Reactivo de lavado
• ·         Pipetas desechables
• ·         Inserto

1.    Si cualquier muestra/reactivo se ha almacenado en refrigeración , permita que se atemperen 20 min. A temperatura ambiente.

2.    Tome  el numero necesario de cartuchos  de prueba

3.    Marque cada prueba con la información apropiada del paciente

4.    Utilizando una  de las pipetas proporcionadas tome  l muestra (suero/plasma/sangre total)

5.    Colocando la pipeta sobre el área de muestra adicione dos cucharadas de muestra (aproximadamente 60 ul) de reactivo   cuidadosamente.

6.    Adicione dos gotas (aproximadamente  60 ul) de reactivo de lavado al área de muestra.

7.    Permita que transcurra exactamente 10 minutos para que la reacción ocurra.

NOTA:

Lo mas recomendable  es realiza la lectura inmediatamente después del tiempo de incubación.

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS:

NEGATIVO: Una línea en el área  de  control únicamente indica un resultado negativo

POSITIVO: Una línea de cualquier intensidad  en el área de prueba, una segunda línea en el área de control  indica un resultado positivo

INVALIDO: Ausencia de una línea en el área de control la  prueba se debe de  repetir con un cartucho nuevo independientemente  de que aparezca una línea en el área de prueba.

CONCLUSION

El método para la detección  de  anticuerpos para el virus de HIV   tipo 1 y tipo 2  es sencillo realizarlo en cartucho de muestra, siendo más rápido y al mismo tiempo seguro, teniendo así el técnico un resultado En 10 min.  solamente, sin costosos procedimientos.

Es una prueba que se realizan personas sospechosas a tener el virus  de VIH, para comprobar las sospechas al tener sintomatología de la enfermedad principalmente.